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          大腸桿菌使用超聲波破碎儀進行操作的效果如何

          發布時間:2020-11-18 17:33   瀏覽:

            大腸桿菌表達外源蛋白,在超聲破碎的時候用超聲波破碎儀便能起到很好的效果,對其他的一些細菌同樣起作用,比如鏈霉菌,下面來詳細的了解一下吧。

            

            細菌沉淀直接加樣品進行混勻、離心、煮沸后直接上樣,染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱,將染色液換成大量的水在微波爐煮就可以了。在表達重組蛋白后超聲波破碎細胞,采用冰浴 ,但是不一會就會產生大量泡沫,影響了破碎功率。
            
            在實驗過程中若產生氣泡是因為探頭位置沒有放好,探頭一定要接近底部,約1cm。功率根據儀器不同也會有所不同,因此可以觀察液面,注意有波動但不要太劇烈機好。變幅桿位置擺放也要注意,聽聲音如果不對的話就要及時調整,另外可以從菌濃度方面考慮。在破碎時試著加大體積,強度不要超過60%。
            
            嘗試超8秒,對有些菌體蛋白來說,很難散熱,導致蛋白變性產生氣泡,因此停留的時間要稍長一點,這種情況多見于包涵體形式的蛋白。
            
            使用超聲波破碎儀在做大腸柑橘超聲時,采用400W,超5停5的方法,效果不錯,但是用在鏈霉菌上,似乎沒有什么效果,可能死由于細胞壁組成差異造成的,因為大腸桿菌屬于革蘭氏陰性菌的。

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